人CX3C趋化因子受体1 (CX3CR1) 的ELISA试剂盒为研究目的而设计,严禁用于医学诊断。该试剂盒采用双抗体一步夹心法(ELISA)进行检测。
实验步骤如下:首先,将样品与已经包被有adropin(AD)抗体的微孔板相结合,依次加入标准品和HRP标记的检测抗体,经过温育后充分洗涤。接着,使用TMB底物进行显色反应,在过氧化物酶的催化下,底物将转化为蓝色,再由酸性条件下转化为黄色。显色的深浅与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关。
最终,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),从而计算样品内的浓度。此过程的标准曲线需要进行多孔复核,以确保结果的准确性。
试剂盒主要成分包括:
- 96孔微孔板或48孔微孔板
- 标准品(浓度:0、25、50、100、200、400 pg/mL)
- 样本稀释液
- 检测抗体-HRP
- 洗涤缓冲液
- 显色底物A和B
- 终止液
- 封板膜
- 说明书
- 自封袋
样本的收集与处理也至关重要。推荐的方法包括:
- 血清:使用无热源和内毒素的试管,避免细胞刺激,3000转离心10分钟,分离血清和红细胞。
- 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,3000转离心30分钟。
- 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒及聚合物。
- 组织匀浆:组织与生理盐水混合,捣碎后3000转离心10分钟。
保存样本时,如未立即检测,请按需分装,冷冻于-20℃,避免反复冻融,以保证样本的稳定性。
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请注意,在使用本试剂盒时,务必遵循操作说明,以确保实验结果的准确性。所有样品及废弃物需按传染性材料处理。此外,不同批次的组分不得混用,以防影响实验结果。