产品名称：pEGFP-ADRB2(human)质粒
产品规格：05ug质粒干粉

收到产品后，请先根据产品管壁标签确认产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态及培养温度。

pEGFP-ADRB2(human)质粒扩增流程

1. 质粒干粉（常温运输，存放于-20℃，保质期90天，请务必进行单克隆培养，不要直接使用或测序）
（1）收到质粒干粉后，请先以5000rpm离心1分钟，然后加入20μl去离子水溶解质粒。
（2）取1支100μl感受态于冰上解冻10分钟，加入2μl质粒，随后在冰浴中孵育30分钟，进行42℃热激60秒，接着再冰浴2分钟。
（3）加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45分钟。
（4）以6000rpm离心5分钟，保留100μl上清液重新悬浮细菌沉淀，并涂布于目标质粒抗性的LB平板上。
（5）将平板正向培养1小时，再倒置37℃培养14小时。如果要求培养温度为30℃，则需培养20小时。（若菌落过多，应稀释质粒后再转化；若无菌落，应加入10μl质粒转化。请确保先转化克隆感受态，然后再重提质粒后导入表达感受态。）
（6）挑取单一菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14小时，随后根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

其他产品形式

2. 甘油菌种（冰袋运输，存放于-80℃，保质期为90天，请务必划线选择单克隆培养）
进行四区划线后挑取单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再进行四区划线，最后再挑单菌落进行液体培养。

3. 穿刺菌种（冰袋运输，存放于4℃，保质期为7天）
穿刺接种，液体培养后进行四区划线，然后挑取单菌落进行液体培养。

4. 菌落平板（冰袋运输，存放于4℃，保质期为7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。

5. 液体质粒（冰袋运输，存放于-20℃，保质期为90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

6. 滤纸质粒（常温运输，存放于-20℃，保质期90天，请务必进行单克隆培养，不要直接使用或测序）
收到产品后剪下滤纸的圆圈部分，放入EP管中，加入100μl无菌水，使滤纸浸湿并浸泡5分钟，吸取5μl质粒进行转化，进行离心全涂。

质粒提取步骤（仅为示例）

操作原理：碱裂解法提取质粒依据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑结构上的差异进行分离。在适宜的pH值范围内，线性DNA的双螺旋结构会解开而被变性，而环状质粒DNA则保持稳定。通过离心，沉淀染色体DNA及其他杂质，得到所需的质粒DNA。

操作步骤：

1. 准备20ml灭菌过的培养管，编号，加入8ml LB培养基及8μl相应抗生素；
2. 用10μl枪头挑取单独菌落至培养管中，37℃震荡过夜；
3. 取2ml过夜培养的菌液于离心管中，室温10000rpm离心2分钟，去除上清；
4. 向离心管中加入250μl Buffer P1（含RNaseA），充分混匀；
5. 加入250μl Buffer P2，轻轻上下颠倒混匀，获得澄清的裂解液；
6. 加入350μl Buffer N3，轻轻混匀后离心；
7. 小心转移上清至吸附柱，离心以去除杂质；
8. 加入Buffer PB及Buffer PW进行清洗，确保去除乙醇；
9. 最后，向吸附柱中加入Buffer EB，进行质粒的收集和保存。

注意事项：

1. 使用之前，将RNA酶加入Buffer P1，4℃保存；
2. Buffer EB预热至65~70℃能够提高提取效率。

如需更多质粒载体，请咨询我们[尊龙凯时]。